AAV具有宿主范圍廣、安全性高、免疫原性低、表達穩定和物理性質穩定等優點,目前被廣泛應用于CGT領域的基礎研究和臨床試驗中。宜明生物擁可提供高品質的AAV系列現貨產品,涵蓋熒光蛋白功能基因,多種AAV血清型可供選擇,滿足客戶不同的實驗需求。
成熟的無血清懸浮
培養體系
擁有成熟的多種血清型
純化平臺
多空殼率檢測平臺
(可選AUC、電鏡、HPLC三種方法進行檢測)
已完成多種血清型RCAAV
檢測方法開發
體外細胞感染
1、制備包含病毒的培養基
根據需要感染的細胞量、病毒滴度及感染MOI值計算所需要的病毒體積,制備包含病毒的培養基。PS:AAV的最佳感染MOI值因AAV血清型、細胞類型和實驗條件而變化很大。通常,易感染細胞系所使用的MOI范圍為1000-50000。但是,對于某些難感染的細胞系,MOI可能需要高2000000。我們建議您查閱文獻或者在正式實驗前,在目的細胞中用含有報告基因的AAV進行預實驗以摸索最佳MOI。
最佳病毒用量的計算公式: AAV病毒體積=最佳MOI×細胞數目/病毒滴度。
例如,如果您目的細胞的最佳MOI=10000,您需要感染106的細胞,那么您共計需要1010 GC的病毒.如果病毒滴度為1×1013 GC/mL,那么您就需要將1ul的病毒加入培養基中。
2、AAV感染細胞
棄掉細胞培養基,將包含AAV病毒的培養基加入細胞中。6-12小時后,您可以更換或者添加新鮮培養基至培養孔或者皿中。在24、48、72和96小時,或者指定時間點,可以檢測基因表達。
體內動物注射
為了確定用于小鼠或其他小動物注射的AAV最佳量,我們建議首次測試三種劑量:1011、1012和1013 GC/kg。
假設您的小鼠是20克,三種劑量是2x109、2x1010和2x1011 GC/小鼠。如果您正在進行非局部注射,您可能還需加入更高的劑量,如4x1011 GC/小鼠。請注意,這些是針對小鼠的通用指南,可能不適用于大型動物模型(如豬、非人靈長類動物)。
| 檢測項目 | 檢測方法 | |
| 鑒別 | ||
| 目的基因序列鑒別 | PCR+Sanger測序 | |
| 含量 | ||
| 基因組滴度檢測 | qPCR | |
| 純度 | ||
| 衣殼蛋白鑒別 | SDS-PAGE | |
| 空殼率檢測 | AUC檢測 | |
| 安全性 | ||
| 內毒素檢測 | 凝膠限度試驗法 |
全程干冰運輸,收到產品后,請于-80℃長期保存。使用前于4℃融化。建議您在收到病毒后按照每次用量進行分裝,避免反復凍融!PS:反復凍融會降低病毒活性!
注意事項
本產品僅限用于基礎研究,不可用于包括人類體外診斷、治療和用于人體在內的其他用途。未經宜明生物的書面批準,不得將產品轉讓、轉售、改造后轉售、生產商業化產品,或者向其他第三方提供服務。
宜明生物可提供多種血清型的熒光蛋白AAV現貨產品,可廣泛用于動物或細胞實驗。
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