CDMO服務(wù)
GMP級生產(chǎn)制備平臺，先進(jìn)治療藥品走向世界和商業(yè)化的橋梁
RNA類
gRNA IVT制備
在基因編輯中，Cas蛋白和gRNA的形成復(fù)合物，由gRNA的特異序列指引與基因組特意靶點(diǎn)結(jié)合，并造成該位點(diǎn)的DNA雙鏈斷裂，逐漸成為CRISPR/Cas9技術(shù)更高效的實(shí)現(xiàn)途徑。宜明生物創(chuàng)新性采用體外轉(zhuǎn)錄（IVT）工藝，避免大規(guī)模化學(xué)合成gRNA成本過高，及有毒化學(xué)試劑殘留風(fēng)險(xiǎn)的問題，通過添加3’端Aptamer特殊序列提高了細(xì)胞內(nèi)gRNA的穩(wěn)定性。為您在細(xì)胞與基因治療領(lǐng)域的研究提供高質(zhì)量的一站式CRO和CDMO整體解決方案。
服務(wù)特色
擁有獨(dú)特的sgRNA修飾技術(shù)與專利，保障sgRNA的功能與基因編輯效率
針對項(xiàng)目需求提供多元化QC工藝，可用于科研實(shí)驗(yàn)，助力臨床研究
擁有GMP的sgRNA原液生產(chǎn)平臺，可進(jìn)行mg級和g級制備服務(wù)
全封閉式隔離器自動化灌裝線可滿足不同需求的制劑灌裝要求
sgRNA一站式CRO和CDMO整體解決方案全流程質(zhì)量管理
制備流程
質(zhì)量控制
| 目錄 | 檢驗(yàn)項(xiàng)目 | 檢驗(yàn)方法 |
| 物理檢查 | ||
| 外觀 | 目視法 | |
| 序列鑒別 | ||
| Sanger 測序 | 一代測序 | |
| 二代測序 | 逆轉(zhuǎn)錄后二代測序 | |
| 含量 | ||
| 濃度 | Nanodrop, UV absorbance | |
| 純度 | ||
| 分子量 | MASS | |
| gRNA純度 | A260/A280 | |
| gRNA純度 | HPLC/CE | |
| 蛋白殘留 | BCA | |
| DNA模板殘留量 | qPCR | |
| T7 RNA聚合酶殘留量 | ELISA | |
| DNase I 殘留量 | ELISA | |
| RNase抑制劑殘留量 | ELISA | |
| 化學(xué)檢定 | ||
| 滲透壓摩爾濃度 | 冰點(diǎn)下降法 | |
| PH值 | pH meter with pH probe | |
| 安全性 | ||
| 無菌檢查 | 直接接種法 | |
| 支原體檢查 | qPCR | |
| 細(xì)菌內(nèi)毒素 | 凝膠法-BDBU |
工藝驗(yàn)證
宜明生物獨(dú)特的IVT制備工藝，模板DNA制備工藝穩(wěn)定，產(chǎn)量穩(wěn)定；經(jīng)純化條帶單一，純度高，有效保障IVT制備sgRNA的產(chǎn)量與質(zhì)量。IVT反應(yīng)原液中sgRNA:DNA質(zhì)量比達(dá)到100:1，sgRNA濃度達(dá)到5 μg/μL;經(jīng)過純化，終產(chǎn)物主峰占比接近100%；總得率大于70%。
技術(shù)對比
sgRNA-IVT 是通過體外轉(zhuǎn)錄基于 dsDNA 模板進(jìn)行的合成制備。該方法較之傳統(tǒng)化學(xué)合成方法更安全，無需使用有毒有機(jī)溶劑和化學(xué)試劑。對上百個堿基的 RNA 序列，傳統(tǒng)化學(xué)合成方法也常容易出現(xiàn)不確定的堿基突變，而 sgRNA-IVT 的制備過程使用了高質(zhì)量的模板和高保真的聚合酶，可以有效降低堿基突變概率。
為了提高 sgRNA 在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性，我們在 sgRNA 的 3’端加入了 RNA aptamer 序列進(jìn)行了修飾，可以使得基因編輯的效率與化學(xué)合成的 sgNRA類似或者更好。
服務(wù)流程
01
需求溝通
02
確定需求
03
簽訂合同
04
預(yù)付款項(xiàng)
05
啟動項(xiàng)目
06
成果交付
